本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥，涉及一種負(fù)載沙棘活性成分的納米纖維膜、制備方法及其作為傷口愈合敷料的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
1、隨著納米技術(shù)的快速發(fā)展，納米材料和基于納米材料的藥物輸送系統(tǒng)已廣泛應(yīng)用于傷口修復(fù)和再生。其中，靜電紡絲納米纖維膜具有較大的比表面積和孔隙率利于氣體交換和滲出物管理、與天然細(xì)胞外基質(zhì)(ecm)的結(jié)構(gòu)相似、優(yōu)異的細(xì)胞活性、有利于細(xì)胞增殖和新組織生長等特質(zhì)，其作為新型傷口敷料已備受研究人員的關(guān)注，在皮膚修復(fù)領(lǐng)域具有巨大的應(yīng)用潛力。
2、從古至今，天然植物藥廣泛應(yīng)用于傷口愈合，這可歸結(jié)于其較小的不良副作用和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。此外，天然植物藥的顯著特征之一是具有多組分協(xié)同機(jī)制，例如可兼具治療創(chuàng)傷性損傷和其他復(fù)雜的病理生理學(xué)疾病的組分，因而具有多種治療益處。在靜電紡絲納米纖維中摻入植物提取物是賦予敷料生物活性是一個(gè)新興的課題。目前，大多數(shù)摻入的植物提取物是以乙醇為溶劑提取的粗提取物，然而天然植物成分結(jié)構(gòu)復(fù)雜，不同的結(jié)構(gòu)可以通過極性不同粗略分離出來，因而不同極性部位的提取物具有的生物活性存在差異。
3、沙棘是一種開花灌木，沙棘果富含多種維生素、脂肪酸、微量元素、類黃酮、超氧化物等活性物質(zhì)，以及人體健康所必需的氨基酸，現(xiàn)有研究表明其具有抗炎、殺菌、改善血管通透性、促進(jìn)血液循環(huán)和調(diào)節(jié)免疫等作用。
4、納米銀(agnps)作為抗菌劑，具有無耐藥性和高效的廣譜抗菌性。盡管agnps的合成方法很多，但大部分都不可避免地需要使用可能對(duì)環(huán)境和人類健康構(gòu)成威脅和有毒化學(xué)品。因此，開發(fā)環(huán)境友好且對(duì)人體無害的agnps綠色合成方法具有重要意義。
5、聚乳酸(pla)是一種出色的生物相容性和生物降解性聚合物，且降解單體可以通過代謝途徑去除，廣泛應(yīng)用于皮膚組織工程和再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。聚乙烯醇(pva)是一種合成聚合物，易溶于水，并具有藥物遞送和組織工程領(lǐng)域的多樣生物學(xué)特性。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、
2、本發(fā)明的目的在于提供一種負(fù)載沙棘活性成分的納米纖維膜、制備方法及其作為傷口愈合敷料的應(yīng)用。
3、實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)方案如下：
4、負(fù)載沙棘活性成分的納米纖維膜的制備方法，包括以下步驟：
5、(1)沙棘活性成分的提?。簩⑸臣扑槌煞勰┖螅?g：5ml的比例加入95％乙醇，進(jìn)行加熱回流提取，提取后過濾收集濾液，并對(duì)藥渣繼續(xù)進(jìn)行加熱回流提取，多次提取后，將所有濾液減壓旋蒸進(jìn)行濃縮，冷凍干燥后得到沙棘乙醇粗提取物(ee)，按1g:20ml的比例將沙棘乙醇粗提取物用60～80℃熱水溶解，加入等體積的石油醚萃取，萃取多次后，將收集的石油醚萃取液減壓旋蒸進(jìn)行濃縮后冷凍干燥，得到沙棘石油醚提取物(pee)，或?qū)⑹占氖兔演腿∫涸?0℃下水浴至石油醚完全揮發(fā)，在余下的水相中加入等體積的乙酸乙酯，萃取多次后，將收集的乙酸乙酯萃取液減壓旋蒸去除溶劑，得到沙棘乙酸乙酯提取物(ea)；
6、(2)將pla溶解在體積比為8:2的二氯甲烷和n,n-二甲基乙酰胺(dmf)的混合溶劑中，得到pla溶液，然后按5g：100ml的比例將沙棘乙醇粗提取物、沙棘石油醚提取物或沙棘乙酸乙酯提取物加入pla溶液中，攪拌至溶解，得到紡絲前驅(qū)液a；
7、(3)將agnps加入到pva的水溶液中，攪拌至均勻分散，得到紡絲前驅(qū)液b；
8、(4)采用雙軸靜電紡絲方法，對(duì)紡絲前驅(qū)液a和b進(jìn)行高壓靜電紡絲，得到負(fù)載沙棘活性成分的納米纖維膜。
9、優(yōu)選地，步驟(1)中，乙醇提取過程中，每次提取時(shí)間為1h，提取次數(shù)為3次；石油醚萃取次數(shù)為3次，乙酸乙酯萃取次數(shù)為3次。
10、優(yōu)選地，步驟(2)中，紡絲前驅(qū)液a中，pla的質(zhì)量體積濃度為6～10％，沙棘乙醇粗提取物、沙棘石油醚提取物或沙棘乙酸乙酯提取物的質(zhì)量體積濃度為3％～5％。
11、優(yōu)選地，步驟(3)中，pva的水溶液的質(zhì)量體積濃度為8～12％；紡絲前驅(qū)液b中，agnps的質(zhì)量體積濃度為3％。
12、優(yōu)選地，步驟(3)中，agnps通過以下方法制備：將洗凈后干燥的沙棘粉碎成粉末，加水，在80℃下水浴2h，過濾，離心，得到沙棘水提取物，然后按體積比為30：1將3mm硝酸銀溶液與沙棘水提取物混合均勻，黑暗條件下，在50℃恒溫水浴下反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后以12000rpm/min離心，干燥得到agnps。
13、優(yōu)選地，步驟(2)和(3)中，攪拌時(shí)間為12h。
14、優(yōu)選地，步驟(4)中，靜電紡絲條件為：電壓18～22kv、收集距離10～20cm、紡絲速度0.3～1ml/h、針頭內(nèi)徑0.7～0.9mm、溫度25～30℃、相對(duì)濕度小于30％。
15、本發(fā)明還提供上述制備方法制得的負(fù)載沙棘活性成分的納米纖維膜。
16、進(jìn)一步的，本發(fā)明提供上述負(fù)載沙棘活性成分的納米纖維膜作為傷口愈合敷料的應(yīng)用。
17、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：
18、(1)本發(fā)明采用雙軸靜電紡絲的形式制備納米纖維，將不同性質(zhì)的pla和pva纖維結(jié)合，兼顧載藥特性和敷料的物理特性，能夠仿生ecm，在傷口修復(fù)過程中為細(xì)胞提供一定的支撐和引導(dǎo)，有利于上皮細(xì)胞的粘附、增殖、遷移和分化。
19、(2)本發(fā)明通過雙軸靜電紡絲的方法，將親水性pva纖維和疏水性pla纖維混合，親水性的pva纖維具有良好的潤濕性能，能有效吸收傷口滲出的體液，為傷口提供一個(gè)濕潤的愈合環(huán)境；同時(shí)，疏水性的pla纖維可以防止敷料與傷口粘連，使得換藥過程更加輕松，不會(huì)給患者帶來額外的痛苦，制備的納米纖維膜既能吸收傷口滲液又不會(huì)粘連傷口，是一種理想敷料。
20、(3)本發(fā)明的納米纖維膜中含有均具有抑菌性能的沙棘活性成分和agnps，因此納米纖維膜對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌也具有抑菌性能。此外，本發(fā)明利用特定方法提取出的沙棘提取物作為沙棘活性成分添加到納米纖維膜中，制得的負(fù)載沙棘活性成分的納米纖維膜在大鼠全層傷口模型中表現(xiàn)出優(yōu)異的促進(jìn)傷口愈合效果。本發(fā)明的負(fù)載沙棘活性成分的納米纖維膜具有良好的生物可降解性、生物相容性，且能與皮膚傷口直接接觸，安全無毒，并具備抗炎、抗菌、促進(jìn)傷口愈合等功能，在敷料領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。
1.負(fù)載沙棘活性成分的納米纖維膜的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）中，乙醇提取過程中，每次提取時(shí)間為1h，提取次數(shù)為3次；石油醚萃取次數(shù)為3次，乙酸乙酯萃取次數(shù)為3次。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（2）中，紡絲前驅(qū)液a中，pla的質(zhì)量體積濃度為6~10%，沙棘乙醇粗提取物、沙棘石油醚提取物或沙棘乙酸乙酯提取物的質(zhì)量體積濃度為3%~5%。
4.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（3）中，pva的水溶液的質(zhì)量體積濃度為8~12%；紡絲前驅(qū)液b中，agnps的質(zhì)量體積濃度為3?%。
5.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（3）中，agnps通過以下方法制備：將洗凈后干燥的沙棘粉碎成粉末，加水，在80℃下水浴2h，過濾，離心，得到沙棘水提取物，然后按體積比為30：1將3?mm硝酸銀溶液與沙棘水提取物混合均勻，黑暗條件下，在50℃恒溫水浴下反應(yīng)2?h，反應(yīng)結(jié)束后以12000?rpm/min離心，干燥得到agnps。
6.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（2）和（3）中，攪拌時(shí)間為12?h。
7.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（4）中，靜電紡絲條件為：電壓18~22?kv、收集距離10~20?cm、紡絲速度0.3~1?ml/h、針頭內(nèi)徑0.7~0.9?mm、溫度25~30℃、相對(duì)濕度小于30%。
8.根據(jù)權(quán)利要求1~7任一所述的制備方法制得的負(fù)載沙棘活性成分的納米纖維膜。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的負(fù)載沙棘活性成分的納米纖維膜作為傷口愈合敷料的應(yīng)用。