本研究具體涉及一種用于檢測(cè)鱘類抗病原感染基因的方法。
背景技術(shù)：
1、鱘魚屬于軟骨硬鱗魚類，其分類地位介于軟骨魚與硬骨魚之間，是研究魚類及脊椎動(dòng)物進(jìn)化的活化石，也是生物免疫系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)上的重要分支節(jié)點(diǎn)。目前，鱘魚還面臨多種疾病威脅，尤其是細(xì)菌性疾病，包括分枝桿菌、產(chǎn)堿假單胞菌、遲緩愛(ài)德華菌、腦膜膿毒性伊麗莎白菌以及弗氏檸檬酸桿菌。
2、p53腫瘤抑制基因作為一種轉(zhuǎn)錄因子廣泛存在于各類生物中，在維持基因組穩(wěn)定性、細(xì)胞周期阻滯、細(xì)胞衰老、細(xì)胞分化、dna修復(fù)、自噬、凋亡及先天免疫調(diào)控中發(fā)揮核心作用。當(dāng)宿主感染dna病毒時(shí)，病毒基因組復(fù)制會(huì)觸發(fā)p53介導(dǎo)的凋亡反應(yīng)從而啟動(dòng)dna損傷反應(yīng)。p53在rna病毒先天免疫應(yīng)答中同樣發(fā)揮作用。此外，p53還參與調(diào)控免疫反應(yīng)，具有抗菌活性。因此，深入研究鱘魚p53基因免疫調(diào)控機(jī)制對(duì)鱘魚疾病防治具有重要意義。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種用于檢測(cè)鱘類抗病原感染基因的方法，利用該方法可以預(yù)防或治療鱘魚病原感染的問(wèn)題。
2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明鑒定了鱘魚中魚類抗病原基因。
3、所述抗病原基因的鑒定方法：設(shè)計(jì)特異性引物以鱘魚cdna為模版pcr擴(kuò)增，并對(duì)其基因結(jié)構(gòu)及氨基酸序列進(jìn)行分析。
4、優(yōu)選的，特異性引物根據(jù)鱘魚轉(zhuǎn)錄組文庫(kù)中抗病原基因設(shè)計(jì)。
5、本發(fā)明還通過(guò)rt-qpcr檢測(cè)了抗病原基因在不同器官中的表達(dá)分布。
6、優(yōu)選的，取樣器官為脾臟、血液、腦、鰓、皮膚、心臟、頭腎、中腎、肝臟、腸道及肌肉。
7、本發(fā)明還分析了病原感染后鱘魚抗病原基因mrna的表達(dá)模式。
8、優(yōu)選的，所述鱘類病原包括病毒rna類似物poly?i:c和海分枝桿菌(mycobacterium?marinum)。
9、體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了抗病原基因的變化情況。
10、根據(jù)本發(fā)明的詳細(xì)說(shuō)明，能有效鑒定鱘魚中抗病原基因。
1.一種鱘類抗病原感染基因的鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鑒定方法，其特征在于，所述抗病原基因?yàn)閜53基因，其cdna全長(zhǎng)為1916bp，包含1173bp的開(kāi)放閱讀框(orf)，編碼390個(gè)氨基酸，genbank登錄號(hào)為on454214。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的鑒定方法，其特征在于，所述基因結(jié)構(gòu)分析包括：
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鑒定方法，其特征在于，所述rt-qpcr檢測(cè)的組織包括：脾臟、血液、腦、鰓、皮膚、心臟、頭腎、中腎、肝臟、腸道及肌肉。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鑒定方法，其特征在于，所述病原感染包括病毒rna類似物poly?i:c刺激和海分枝桿菌(mycobacterium?marinum)感染。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的鑒定方法，其特征在于，所述poly?i:c刺激實(shí)驗(yàn)采用鱘魚脾臟細(xì)胞系，檢測(cè)感染后3h、6h、12h、24h和48h的基因表達(dá)變化。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的鑒定方法，其特征在于，所述海分枝桿菌感染實(shí)驗(yàn)采用鱘魚外周血淋巴細(xì)胞，檢測(cè)感染后4h、8h、12h、24h和48h的基因表達(dá)變化。
8.一種鱘類抗病原感染基因的應(yīng)用，其特征在于，所述抗病原基因?yàn)閜53基因，用于制備鱘魚病害防控制劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述病害防控制劑用于抑制病毒復(fù)制或細(xì)菌胞內(nèi)存活，從而提高鱘魚抗病能力。